Rat overlerinin heterotopik transplantasyonunda overyan rezerv korunması açısından c vitamini ve sildenafil molekül etkinliklerinin karşılaştırılması
Küçük Resim Yok
Tarih
2021
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Maltepe Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü
Erişim Hakkı
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 United States
info:eu-repo/semantics/openAccess
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Tezimde; rat overlerinin heterotopik transplantasyonunda over rezervlerinin korunması açısından C vitamini ve sildenafil moleküllerinin etkinliklerinin karşılaştırılması amaçlanmıştır. Bu sayede çocukluk çağı kanserleri, otoimmün hastalıklar, endometrioma gibi nedenlerle tedavi altına alınan ve bir sebeple prematür ovaryan yetmezlik gelişmesi muhtemel kadınlarda, over rezervini over dokusunun re transplantasyonundan sonra koruyabilmek için önerilebilecek tedavi modaliteleri deneylenmiştir. 30 Adet 12 haftalık wistar albino cinsi dişi rat altışarlı gruplara ayrıldı. Gruplar, sham, kontrol, sildenafil, C vitamini, sildenafil ve C vitamini olacak şekilde belirlendi. Her bir grubun özellikleri; 1. Grup: Sadece overler görülüp dokunulmadan kapatıldı. 2. Grup: Overlere otolog transplantasyon yapıldı ve farelere herhangi bir medikasyon yapılmadı; 3. Grup: operasyonun ardından sadece sildenafil 15 mg/kg/gün günde iki kerede gavaj yoluyla verildi. 4. Grup: operasyon sonrası sadece C vitamini 500 mg/kg günde bir kere gavaj yoluyla verildi. 5. Grup: Operasyon sonrası farelere hem C vitamini 500 mg/kg günde bir kez hem de sildenafil 15 mg/kg/gün günde iki kerede gavaj yoluyla uygulandı. İlk operasyondan 3 hafta sonra denekler yeniden opere edildi. Over dokuları transplante edilen her iki taraf hipokondriyak cilt altı bölgeden alındı. Aynı operasyonda her denekten intrakardiyak 5 cc kan alındı. Ardından denekler sakrifiye edildi. Kanlar serumlarına ayrılarak -20 Co de saklandı. Over dokuları patolojik inceleme için formol solüsyonu içerisinde laboratuvara ulaştırıldı. Her over dokusundan 5 er kesit hazırlandı. Hemotoksilen- eosin ile boyanarak ışık mikroskobu altında 50/100/400’lük bakı altında incelendi. Her over için hazırlanan preparatların en çok primordial folikül içerenleri seçildi. Her grup için toplam primordial folikül, primer folikül, antral folikül, graf folikül, korpus luteum, korpus albikans ve nekroz oranları, belirlendi. Gruplar arasında morfolojik fark incelendi. Ayrılan serumlardan “FSH, E2, SOD, AMH hormon” analizi yapıldı. “MIS/AMH BT-LAB Kit (Cat.No:E0456Ra)” ile AMH analizi, yine aynı firmanın “FSH BT-LAB Kit (Cat.No:E0182Ra)” ile FSH analizi, yine aynı firmanın “Rat Super Oxidase Dismutase ELISA Kit (Cat.No:E0168Ra)” ile SOD analizi ve “Elabscience firmasının Rat/Porcine E2(estradiol) ELISA Kit (Cat.No:E-EL 0152)” ile niceliksel veri elde edildi. Grup ortalamaları arasında farkların anlamlılığı “Kruskal-wallis, mann-whitney u” test kullanıldı. Korelasyon analizinde “spearman korelasyon analizi” kullanıldı. Çalışmamda, “IBM SPSS Statistics Version 27 bilgisayar programı” kullandım. P<0,05 kabul edildi. Elde ettiğimiz verilere göre ovaryan dokunun transplantasyonu sonrası herhangi bir medikasyon yapılmazsa rezervinde %90’lara varan kayıp olmaktadır. Bu bulgumuz literatürle uyuşmaktadır. Ancak güçlü bir antioksidan olan C vitamini ile medikasyon sağlandığında bu kayıplar yarı yarıya azalmaktadır. En fazla rezervin korunması C vitamini ve sildenafil ® molekülünün birlikte kullanımı ile sağlanmıştır. “cGMP” Üzerinden etki göstererek NO birikimi yapan ve bu sayede vasküler permeabilite artışı, düz kas gevşemesi ve doku kapiller kanlanmasını artıran Sildenafil’® in tek başına kullanımı over rezervini koruma açısından tek başına C vitamini kadar etkili bulunuştur. Bu açıdan bakıldığında bulgularımız literatür verileri ile örtüşmektedir. Sonuç olarak otolog over dokusu transplantasyonunda Sildenafil ve C vitamini moleküllerinin birlikte kullanımı over rezervini korumak için oldukça etkili bir yaklaşım olabilmektedir. Medikasyon yapılmadan bu rezervin %80-90 kadarı hipoksi ve sonrasındaki oksidatif stres hasarı gibi nedenlerle kaybedilirken sildenafil ® ile C vitamini birlikte kullanımı bu rezerv kaybını %30 – 10 ile sınırlandırabilmektedir.
The study is performed to evaluate the effect of vitamin C sildenafil citrate on preservation of ovarian reserve after heterotopic transplantation of rat ovary. In this way, treatment modalities that can be recommended to preserve ovarian reserve after re-transplantation of ovarian tissue in women who are under treatment for reasons such as childhood cancers, autoimmune diseases, endometrioma and who are likely to develop premature ovarian failure for some reason have been tested. Adult 30 Wistar albino rats at eustrous phase are divided into 6 groups randomly. G1 (n=6); Only laparotomy done. G2 (n=6): Autolog bilateral ovarian transplantation without medication. G3 (n=6): ): Sildenafil citrate group (sildenafil citrate per oral administered 15 mg/kg/twice a day) after autolog bilateral ovarian transplantation G4 (n=6): Vitamin C group (vitamin C per oral administered 500 mg/kg/once a day) after autolog bilateral ovarian transplantation G5 (n=6) Mix group: Both vitamin C (per oral 500/mg/kg/once a day) and sildenafil citrate (per oral15 mg/kg/twice a day) administered after autolog bilateral ovarian transplantation. Subjects were re-operated 3 weeks after the first operation. Transplanted bilateral ovarian tissues were excised from the hypochondriac subcutaneous region. 5 cc of intracardiac blood sample was taken from each rat synchronously with operation and then all are sacrificed. The blood was separated into serum and stored at -20°C. Ovarian tissues were delivered to the laboratory in 10% formaldehyde solution for fixation and pathological examination. They are embedded into paraffin block and sliced into 5 slice sections from each ovarian tissue. We stained the materials with hematoxylin-eosin and examined under a light microscope at 50/100/400. Of the preparations prepared for each ovary, those containing the most primordial follicles were selected. For each group, the total primordial follicle, primary follicle, antral follicle, graphite follicle, corpus luteum, corpus albicans and necrosis rates were determined. The morphological difference between the groups was examined. Serum analyzed for FSH, E2, SOD, AMH hormone levels. AMH analysis done with MIS/AMH BT-LAB Kit (Cat.No: E0456Ra), FSH analysis done with FSH BT-LAB Kit (Cat.No: E0182Ra) of the same company, Rat Super Oxidase Dismutase analysis done with ELISA Kit (Cat. No) of the same company: E0168Ra) and quantitative data were obtained with the Rat/Porcine E2(estradiol) ELISA Kit (Cat.No: E-EL-0152) from Elabscience. Significance of differences between groups were analysed statistically by using Kruskal-wallis, Mann-whitney u test. Spearman correlation analysis was used in the correlation analysis. SPSS 27.0 program was used. P<0.05accepted as statistically meaningful. According to the data we have obtained, the ovarian tissue loss was nearly 90% if no medication is administered after the transplantation. This finding is consistent with the literature. However, these losses are reduced by half when medication is provided with vitamin C, a powerful antioxidant. Protection of the maximum reserve is provided by the use of vitamin C and sildenafil ® molecule together. The use of Sildenafil® alone, which accumulates NO by acting on “cGMP” and thus increases vascular permeability, smooth muscle relaxation and tissue capillary blood supply, has been found to be as effective as vitamin C alone in terms of preserving ovarian reserve. As a conclusion, combination of Sildenafil and vitamin C molecules in autologous ovarian tissue transplantation can be a very effective approach to preserve ovarian reserve. They limit the reserve loss up to 30-10 %. However, more prospective randomized trials needed for future.
The study is performed to evaluate the effect of vitamin C sildenafil citrate on preservation of ovarian reserve after heterotopic transplantation of rat ovary. In this way, treatment modalities that can be recommended to preserve ovarian reserve after re-transplantation of ovarian tissue in women who are under treatment for reasons such as childhood cancers, autoimmune diseases, endometrioma and who are likely to develop premature ovarian failure for some reason have been tested. Adult 30 Wistar albino rats at eustrous phase are divided into 6 groups randomly. G1 (n=6); Only laparotomy done. G2 (n=6): Autolog bilateral ovarian transplantation without medication. G3 (n=6): ): Sildenafil citrate group (sildenafil citrate per oral administered 15 mg/kg/twice a day) after autolog bilateral ovarian transplantation G4 (n=6): Vitamin C group (vitamin C per oral administered 500 mg/kg/once a day) after autolog bilateral ovarian transplantation G5 (n=6) Mix group: Both vitamin C (per oral 500/mg/kg/once a day) and sildenafil citrate (per oral15 mg/kg/twice a day) administered after autolog bilateral ovarian transplantation. Subjects were re-operated 3 weeks after the first operation. Transplanted bilateral ovarian tissues were excised from the hypochondriac subcutaneous region. 5 cc of intracardiac blood sample was taken from each rat synchronously with operation and then all are sacrificed. The blood was separated into serum and stored at -20°C. Ovarian tissues were delivered to the laboratory in 10% formaldehyde solution for fixation and pathological examination. They are embedded into paraffin block and sliced into 5 slice sections from each ovarian tissue. We stained the materials with hematoxylin-eosin and examined under a light microscope at 50/100/400. Of the preparations prepared for each ovary, those containing the most primordial follicles were selected. For each group, the total primordial follicle, primary follicle, antral follicle, graphite follicle, corpus luteum, corpus albicans and necrosis rates were determined. The morphological difference between the groups was examined. Serum analyzed for FSH, E2, SOD, AMH hormone levels. AMH analysis done with MIS/AMH BT-LAB Kit (Cat.No: E0456Ra), FSH analysis done with FSH BT-LAB Kit (Cat.No: E0182Ra) of the same company, Rat Super Oxidase Dismutase analysis done with ELISA Kit (Cat. No) of the same company: E0168Ra) and quantitative data were obtained with the Rat/Porcine E2(estradiol) ELISA Kit (Cat.No: E-EL-0152) from Elabscience. Significance of differences between groups were analysed statistically by using Kruskal-wallis, Mann-whitney u test. Spearman correlation analysis was used in the correlation analysis. SPSS 27.0 program was used. P<0.05accepted as statistically meaningful. According to the data we have obtained, the ovarian tissue loss was nearly 90% if no medication is administered after the transplantation. This finding is consistent with the literature. However, these losses are reduced by half when medication is provided with vitamin C, a powerful antioxidant. Protection of the maximum reserve is provided by the use of vitamin C and sildenafil ® molecule together. The use of Sildenafil® alone, which accumulates NO by acting on “cGMP” and thus increases vascular permeability, smooth muscle relaxation and tissue capillary blood supply, has been found to be as effective as vitamin C alone in terms of preserving ovarian reserve. As a conclusion, combination of Sildenafil and vitamin C molecules in autologous ovarian tissue transplantation can be a very effective approach to preserve ovarian reserve. They limit the reserve loss up to 30-10 %. However, more prospective randomized trials needed for future.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Rat, Over rezervi, Sildenafil, C vitamini, Prematür ovaryan yetmezlik, Over transplantasyonu
Kaynak
WoS Q Değeri
Scopus Q Değeri
Cilt
Sayı
Künye
Ayan, M. T. (2021). Rat overlerinin heterotopik transplantasyonunda overyan rezerv koruması açısından C vitamini ve sildenafil molekül etkinliklerinin karşılaştırılması (Yayımlanmamış Tıpta Uzmanlık Tezi). Maltepe Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, İstanbul.
